一、RNA HS Assay Kit存放條件與注意事項(xiàng)：

　　1.溫度要求

　　未開(kāi)封試劑盒：存放在-20℃，避免反復(fù)凍融。

　　已開(kāi)封試劑盒：密封后可短期存放于4℃，建議1個(gè)月內(nèi)用完，避免活性成分降解。

　　關(guān)鍵組分：若頻繁使用，可分裝后存于-20℃，減少凍融次數(shù)。

　　2.防潮與避光

　　試劑盒應(yīng)遠(yuǎn)離潮濕環(huán)境，避免吸濕導(dǎo)致粉末結(jié)塊或酶失活。

　　避光保存熒光染料、底物等光敏成分，可用鋁箔紙包裹試劑盒或存放于暗盒中。

　　3.防止污染

　　開(kāi)封后立即蓋緊管蓋，操作時(shí)避免說(shuō)話(huà)、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠污染。

　　使用前后擦拭操作臺(tái)和移液器，建議在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。

　　二、RNA HS Assay Kit使用前準(zhǔn)備：

　　1.試劑檢查

　　離心確認(rèn)：開(kāi)蓋前輕柔離心，確保管壁殘留液體沉底。

　　溶解沉淀：若試劑因運(yùn)輸出現(xiàn)結(jié)晶，需室溫緩慢溶解并混勻，避免高溫或超聲波破碎。

　　有效期驗(yàn)證：檢查試劑瓶標(biāo)簽上的有效期和批次號(hào)，過(guò)期或性狀異常的試劑勿用。

　　2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化

　　設(shè)置對(duì)照組：每次實(shí)驗(yàn)需包含無(wú)模板對(duì)照（NTC）、陽(yáng)性對(duì)照（如標(biāo)準(zhǔn)品）和陰性對(duì)照（如水替代模板）。

　　預(yù)混Master Mix：提前配制含熒光染料、酶、dNTP等的主混合液，漩渦振蕩混勻后短暫離心，減少分裝誤差。

　　引物驗(yàn)證：新引物需通過(guò)梯度稀釋測(cè)試擴(kuò)增效率，避免非特異性擴(kuò)增或引物二聚體干擾。

　　三、RNA HS Assay Kit操作技巧：

　　1.加樣規(guī)范

　　精準(zhǔn)移液：使用經(jīng)校準(zhǔn)的移液器，加樣時(shí)垂直插入液面下，避免氣泡產(chǎn)生。

　　順序調(diào)整：最后加入模板RNA或反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，減少交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。

　　預(yù)混震蕩：加樣后輕輕拍打管壁混勻，或使用低速渦旋儀。

　　2.避免RNA降解

　　冰上操作：全程在冰盒或低溫金屬板上操作，尤其是RNA模板和逆轉(zhuǎn)錄步驟。

　　DNase處理：若RNA含痕量DNA，需用無(wú)核酸酶的DNase I處理，并徹*去除酶活性。

　　使用RNA酶抑制劑：在反應(yīng)體系中添加RNase 抑制劑，尤其在樣本量低時(shí)。

　　3.儀器設(shè)置

　　熒光閾值調(diào)整：在指數(shù)擴(kuò)增期設(shè)定閾值，避免過(guò)高或過(guò)低。

　　溫度校準(zhǔn)：定期檢查PCR儀的溫控準(zhǔn)確性。

　　多通道校正：若使用多通道熒光檢測(cè)，需對(duì)各通道進(jìn)行交叉補(bǔ)償校準(zhǔn)。